產(chǎn)品描述
CW003培養(yǎng)基適用于sf9、High Five等昆蟲細胞懸浮培養(yǎng)和瞬時表達,含有細胞生長的全
部營養(yǎng)成分,無需添加物即可使用。
產(chǎn)品名稱:HSF95 Insect Cell Medium
產(chǎn)品貨號:CW003
產(chǎn)品規(guī)格:1L
產(chǎn)品特點
? 產(chǎn)品不含血清
? 即用型培養(yǎng)基,無需添加額外成分
? 支持sf9、High Five等昆蟲細胞的懸浮培養(yǎng)馴化與高密度培養(yǎng)
? 支持桿狀病毒載體表達系統(tǒng)生產(chǎn)重組基因蛋白
基礎參數(shù)
編輯
產(chǎn)品使用方法
細胞馴化與傳代
1) 培養(yǎng)條件
溫度:27oC;推薦搖床轉(zhuǎn)速:110-130 rpm;傳代細胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。
2) 直接馴化
大部分情況下,培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的sf9、High Five細胞,可以直接適應至CW003培養(yǎng)
基,只要按照日常傳代方式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。
3) 漸進式馴化
注意:選用低代次、處于對數(shù)生的細胞進行馴化。
①在原培養(yǎng)基中復蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定,使用原培養(yǎng)基
+CW003培養(yǎng)基(CW003比例從25%至90%)逐漸馴化,傳代細胞密度控制在0.8-1.1×106
cells/mL,每48h進行傳代。
②待細胞在含90%以上CW003培養(yǎng)基生長正常后,可嘗試將細胞傳代至100% CW003培養(yǎng)基
中,并連續(xù)傳代3-4次,如細胞保持穩(wěn)定生長,即已適應至CW003培養(yǎng)基。
細胞復蘇
1) 迅速取出凍存的細胞,在37℃水浴條件下進行快速解凍(可以在水中輕輕晃動,時間控制
在120s以內(nèi)),至凍存管內(nèi)剩余小塊冰晶。
2) 在生物安全柜中,將融化的細胞全部轉(zhuǎn)移至無菌離心管中,加入10 mL預熱至37℃的培養(yǎng)
基,離心換液(175 g,5 min)去除全部上清,加入20-30mL預熱至37℃新鮮培養(yǎng)基重懸,后
轉(zhuǎn)移至搖瓶培養(yǎng)。
細胞凍存
1) 凍存細胞時,要選擇處于對數(shù)生、狀態(tài)良好,活力≥98%的的細胞;
2) 事先計算好凍存的細胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積,凍存密度為2.5-3.5×107 (通常凍存
濃度為1.0-2.0×107)cells/ml/支;
3) 細胞凍存液配制:
45%新鮮培養(yǎng)基+45%原培養(yǎng)基(上清)+10%DMSO,充分混勻,存放于4℃,一般為當
天用當天制備;
4) 以175 g,5 min的條件離心收集細胞,棄上清,用凍存培養(yǎng)基(
4℃ )重懸細胞;
5) 將重懸的細胞液迅速分裝細胞到無菌的凍存管中,每支1ml,并貼好標簽;
6) 將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預冷)中,置于-80℃ 冰箱(每
分鐘下降1℃),過夜存放后將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中進行保存。